PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 1、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 2、PCR试剂的污染: 主要是由于在PCR

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种严重的自身免疫性疾病，主要特征为免疫调节功能紊乱，通过自身反应性细胞和抗体可引发炎性细胞因子的过度产生和攻击正常组织(心脏、关节、皮肤、肺、血管、肝脏、肾脏和神经系统)。流行病学数据显示，我国SLE疾病负担较重，预估发病率约为8.57/10万人年，位居全球第四位。其中约90%的SLE患者是女性，其余10%为男性及儿童。研究显示，SLE患者5年生存率从20世纪50年代的50%~60%升高至90年代的超过9

荧光定量 PCR 的主要用途之一是对RNA进行相对定量分析，而提到相对定量，必然离不开内参，那什么是内参基因？为什么相对定量必须使用内参基因？如何选择合适的内参基因？今天，小助手聊聊实验室遇到的内参那些事。 一、什么是内参基因？ 内参基因，也称为管家基因，即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。所以叫内参基因。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，

1、引物最好在模板cDNA 的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在15~30 碱基之间 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3、引物GC 含量在40%~60%之间， Tm 值最好接近72℃ GC含量（composition）过高或

组学研究按照分析目标不同主要分为基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学研究。 基因组学研究的主要是基因组DNA，研究方法目前以二代测序为主，将基因组拆成小片段后，再用生物信息学算法进行迭代组装。当然这仅仅是第一步，随后还有繁琐的基因注释等数据分析工作。 转录组学研究的是某个时间点的mRNA总和，可以用芯片，也可以用测序。芯片是用已知的基因探针，测序则有可能发现新的mRNA。 蛋白组学针对的是全体蛋白，组要以2D-Gel和

1. 分子杂交与印迹技术 （1）探针是经过特殊标记，能与待测单链核酸分子互补结合的已知核酸片段 （2）印迹是将电泳分离后的大分子转印到硝酸纤维素膜上，以便杂交的技术 （3）DNA印迹：Southern blotting，用于检测基因组DNA （4）RNA印迹：Northern blotting，主要用来检测mRNA的表达水平 （5）蛋白质印迹：Western blotting，用于检测蛋白质的水平 2. PCR技术 （1）反应体系：单链DNA模板、特异性DNA引物、耐热DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的缓冲液

抑郁症是一种情感性精神障碍，以显著而持久的心境低落、快感缺失、绝望感和无价值感为主要特征，并伴有植物神经功能紊乱的综合征。世界卫生组织的统计数据表明抑郁症的全球发病率达10%～15%，抑郁症的高自杀和自残率严重危害患者的身心健康、工作学习生活及社会交往，同时产生极大的社会经济负担。抑郁症正成为继心脑血管疾病之后导致人类死亡和致残的第二大类疾病。 大鼠和小鼠抑郁行为检测方法是基于兴趣缺失、心境低落、绝望和无

大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数过多会将使含有的蛋发生降解和沉淀，这将会影响它的性能。

一、实验准备 1、健康的HEK 293T细胞，一般使用复苏后10代以内的细胞进行慢病毒的生产，要求无细菌、真菌以及支原体污染； 2、转染试剂，如PEI、Higene、lipo2000或lipo3000 各种转染试剂的步骤稍有差别，小助手以PEI为转染试剂。 3、DMEM无血清无双抗培养基、DMEM完全培养基（10%FBS和1%P/S）； 4、10mL无菌注射器(环氧乙烷灭菌处理)； 5、0.45μm的细菌滤器。 二、包装步骤 Day1（7:00 PM）铺板HEK 293T细胞 数量：400万/10 cm dish ；觉得计数麻烦的话，可以在293T细胞长

培养基的作用是为微生物提供生长和繁殖所需的营养物质和环境条件。培养基的质量直接关系到检验结果的准确性和可靠性，因此对于微生物检验而言，培养基的质量控制尤为重要。培养基的主要作用有两方面：①提供微生物生长所需的营养物质；②培养基具有选择性和差异性，可以选择特定类型的细菌或真菌进行培养，并区分不同种类的微生物。因此，在微生物检验中，必须对培养基进行严格的质量控制，只有优质的培养基才能为微生物检验提供精

Ct值是什么？ qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。 为什么要有Ct值？ 模板量与Ct值的关系： 在PCR指数扩增过程当中，产物量与循环数之间的关系是：扩增产物量=起始模板量×（1+En）循环个数。 Ct值的设定： qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现，也就是扩增曲线。在扩增过程当中，

无缝克隆的原理： 在载体末端和引物末端应具有15-25个同源碱基（同源臂）。通过T5核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶，三种酶同时发挥功能，从而达到单片段或多片段与载体连接的技术。 T5核酸外切酶：5‘→3’端消化DNA片段， 形成粘性末端；DNA聚合酶：填补缺口； DNA连接酶：两条DNA 单链黏合起来。 无缝克隆的特点 传统分子克隆 无缝克隆 传统分子克隆和无缝克隆对比： 单次插入片段：传统分子克隆一轮只能插入一个片段；无缝克隆单个至多个（

常见原因及解决方法： 1、传代前细胞密度太大：一般细胞汇合度达到80%时可进行传代操作，传代密度需适中，传代密度过高也会导致传代后漂浮； 2、细胞状态不好：可通过提高血清比例、稳定培养环境等方法进行改善； 3、吹打次数过多造成机械损伤：轻柔吹打，细胞呈单颗粒时可停止吹打，吹打过程避免气泡产生； 4、培养基更换后不适应：更换回原来的培养基；或者与原培养基比例混合后使用，使细胞有个适应期。

最近关于新冠会引发心肌炎的问题传的非常热，各大医院均可见到“阳康”后患心肌炎的患者。小编的家属就是一位“阳康”后患心肌炎患者。 心肌炎是什么病？ 心肌炎是指心肌发生的的局限性或弥漫性炎症病变，可由多种病因引起，主要是由病毒、细菌、立克次体等病原微生物感染而致，其中以病毒性心肌炎最为常见，如柯萨奇B组病毒、Echo病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒等感染都可引起，另外免疫因素、物理损伤、药物等非感染因素也会引起

在我国，慢性腹泻是婴幼儿发病率很高的疾病，6个月至2岁的婴幼儿发病率最高，1岁以内约占50%，对儿童的生长发育及健康危害极大，已成为世界公共性卫生问题。慢性腹泻病因复杂，包括过敏、感染、免疫缺陷、酶缺陷、药物及先天畸形等，以急性感染性腹泻未彻底治疗、迁延不愈最为常见。从病理生理学角度，慢性腹泻病还可细分为渗透性腹泻、分泌性腹泻、动力障碍性腹泻和炎症性腹泻，其中渗透性腹泻在儿童中相对常见。 本次小助手讲解两

一、保存温度和条件 很多抗体的最佳保存条件是分装成小包装冻存于-20°C或-80°C。分装能使冻融引起的损失减到最小，同时可避免多次在一个管内取样而由枪头引入的污染。分装冻存的抗体，融解一次后剩余抗体应保存于4°C。收到抗体后，应10,000 x g 离心20秒，使管口螺纹内的抗体溶液全部离心至管底，用低蛋白吸附性的微量离心管分装。分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不能少于10μl；分装量越少，由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损

乳腺具有独特的出生后发育特点，并且其发育处于高度动态变化的进程中。乳腺干细胞正常的自我更新和分化是维持乳腺出生后高度动态发育的基础，该过程受到微环境中细胞和分子信号的精确时空调控。巨噬细胞是乳腺微环境中分布最广泛的免疫细胞，在乳腺发育和乳腺干细胞命运决定的调控中发挥着不可替代的作用，但巨噬细胞调控乳腺干细胞命运和乳腺上皮稳态的分子机制仍不甚清楚。 2023年5月2日，武汉大学医学研究院、免疫与代谢前沿科学

动物实验 细胞实验 动物造模 19970061529

在蛋白质比色定量试验中，最常用的方法是二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法？BCA法是Lowry测定法的一种改进方法，与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法操作更简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度高（微量检测可达到0.5μg/ml），应用更加灵活。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么？ 大多数蛋白样品可通过比色测定法定量，

一大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，今天小助手介绍几种最常用的方法： 01小量质粒DNA的提取 一、碱裂解法： 此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。 2、37℃振荡培养过夜。 3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。 4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L T

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按微生物学质量控制的程度分类，可分为四类： (1)普通动物(conventional animals，CV)：亦称一级动物，在微生物学控制上要求最低的动物，它要求不携带人畜共患病和动物烈性传染病的病原。因价格低，故教学实验中常用之。 (2)清洁动物(clean animals，CL)：亦称二级动物，除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。 (3)无特殊病原体动物(specific pathogen free animals，SPF)：亦称三级动物，也就是我们常说的SPF级动物。是指动物

实验鼠类品种介绍——和你想象中的老鼠有区别吗 ICR小鼠 介绍 icr小鼠优点是除了抗病力和适应力强，繁殖率和成活率高之外，从全球范围来看，它的使用更为普遍！ 发表文章时，动物品系这一考核指标，更容易被接受。它的缺点是，不同地域饲养的封闭群差别也较大，主要用于安全评价，药理学、毒理学、免疫学等实验研究。

皮下注射优缺点 实验外包 动物造膜 荧光检测 分子蛋白细胞等 皮下注射的操作与腹腔注射前半部分相同，针头平行扎入皮内，但是针头并不用呈现向腹腔刺入的步骤，然后注射样品，在皮下会鼓起一个小包。 皮下注射优点：通过微血管吸收，需迅速达到药效、不能或不宜经口服给药时采用。如胰岛素口服在胃肠道内易被消化酶破坏，失去作用，而皮下注射迅速被吸收。 皮下注射 缺点：不是药物都适用，有些会影响药物的作用时间，影响吸收。

小鼠腹腔注射 腹腔注射 要点回顾 ①抓取小鼠，使其腹部朝上头部略向下垂 ②抓紧背部皮肤使使腹部皮肤紧绷，于两大腿根连线与腹中线交叉点一侧约1厘米位置刺入皮下 ③在皮下平行腹中线推进针头3-5mm，再以45°角向腹腔内刺入 ④针尖通过腹肌后，抵抗力消失，回抽无回流物，缓慢推入药物。 注意 ①腹腔注射是很常见的给药方式，注射剂量大，注射后腹膜吸收能力强 ②参考给药量：每次给药量小鼠0.2-0.8ml.

慢性支气管肺炎模型 常选用大鼠、豚鼠或猴吸入刺激性气体(如二氧化硫、氯、氨水、烟雾等)复制人类慢性气管炎。现发现猪粘膜下腺体与人类相似,且经常发生气 管炎及肺炎,故认为是复制人类慢性气管炎较合适的动物，用去甲肾上腺素可以引起与人类相似的气管腺体肥大。

荧光素酶表达的淋巴瘤NCG小鼠模型的构建 淋巴瘤是发生在淋巴结及或淋巴结外淋巴组织的恶性肿瘤，可分为霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤，在青壮年中发病率比较高。据世界卫生组织统计，目前全球每年约有35万新发淋巴瘤患者，死亡患者人数超过20万。我国淋巴瘤发病率为0.02‰，每年新增患者约2.5万人，死亡2万人。淋巴瘤已经严重威胁人类健康，建立合适的动物模型是研制抗肿瘤药和了解血液肿瘤发展的重要手段。

泌尿系结石是一种常见的疾病，严重影响人们的健康和生活质量，其可以引起明显的临床症状，包括尿路感染、腰痛、肾孟积水、肾功能下降等。在亚洲，不同国家发病率不同，约10%~19.1%。由于在第1次发作后的5~10年内复发率高达50%，所以重复手术干预的比例很高。由于泌尿系结石的影响因素多元化，缓解方法困难，因此必须有可行的动物模型被用于研究该疾病。 动物的选择 大鼠、小鼠。其中大鼠是草酸钙结石的主要动物模型。 造模方法 一、草酸钙

动物造模：大小手术模型 药物诱导模型 模型评价监测：行为学检测 影像检测 生化生理指标检测 细胞培养 细胞爬片 细胞转染 流式细胞术 慢病毒包装 细胞划痕 细胞迁移 细胞侵袭 稳定株筛选等 硬组织切片 不脱钙切片 脱钙 软化 包埋 切片 染色 特殊染色 免疫组化 免疫荧光 病理图像采集等 荧光定量PCR服务 miRNA检测 DNA定量 甲基化测序 质粒提取 质粒构造 菌种鉴定 慧星实验 引物合成等 蛋白质纯化 蛋白质双向电泳 单克隆抗体制备 原核表达 免疫沉淀

脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）目前占全部脑卒中发病的10%～20%，依靠目前的循证医学方法，对其有用的治疗手段较少。ICH患者于30d内死亡的可能性高达35%～52%，且有80%的患者在出血后6个月时生活仍不能自理。ICH的致死致残率很高，且目前治疗中能提升患者生存率以及提高出血后生活质量的较少。因此，构建能够模拟疾病发生发展的动物模型极为重要。 动物的选择 大鼠、小鼠、兔、猴、狗、猪。其中，SD大鼠是目前最常用的脑出血实验动物，其优

脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）目前占全部脑卒中发病的10%～20%，依靠目前的循证医学方法，对其有用的治疗手段较少。ICH患者于30d内死亡的可能性高达35%～52%，且有80%的患者在出血后6个月时生活仍不能自理。ICH的致死致残率很高，且目前治疗中能提升患者生存率以及提高出血后生活质量的较少。因此，构建能够模拟疾病发生发展的动物模型极为重要。 动物的选择 大鼠、小鼠、兔、猴、狗、猪。其中，SD大鼠是目前最常用的脑出血实验动物，其优

咳嗽是呼吸系统疾病最常见的主要症状之一，也是人体的一种保护性呼吸反射动作。通过咳嗽反射虽能有效清除呼吸道内的分泌物或进入气道的异物，但咳嗽也有其不利的一面，如长期，频繁，剧烈咳嗽影响工作，休息，甚至引起喉痛，音哑和呼吸肌痛，剧烈咳嗽可导致呼吸道出血。动物实验模型作为研究工具，为人类咳嗽的研究提供了理论依据。本文通过对咳嗽动物模型的相对全面的介绍，特别是对相关模型的评价，为研究咳嗽反应性增高的外周和

近期，中国医学科学院基础医学研究所杜文静教授在EMBO Journal杂志上发表了题为 p53 protects against alcoholic fatty liver disease via ALDH2 inhibition (p53通过抑制ALDH2保护酒精性脂肪肝的发生) 的研究论文。 P53是什么？ p53因其在肿瘤抑制中的功能而闻名，肿瘤抑制因子p53通过其靶基因控制多种生物过程，包括细胞凋亡、细胞周期、DNA修复和细胞增殖。 最近十几年的研究表明，p53在调节葡萄糖、脂质和氨基酸等的代谢中起着重要作用，但p53在不同的肝脏疾病中也有作

近视是目前全球发生率最高的屈光不正。现代医学上认为近视主要是遗传因素和环境因素两者共同作用产生的结果，临床上近视最突出的症状是远视力降低，看物体模糊、困难，也就是所谓的"远视力低常"。形成近视后要想看清前方物体，通常需要将物体移近或靠近一点，或是经常将眼眯起，近视的度数愈高远视力愈差。目前近视研究已历经100多年历史，在这期间，研究人员以动物为基础建立了多种近视模型以探寻近视发生的机制。 动物的选

小型猪作为实验动物已广泛应用于皮肤烧伤、肿瘤、免疫、心血管病、畸形学、人类活组织的供体、遗传病，营养代谢病、新药代谢研究等生物医学研究的多个方面。 小型猪的介绍 小型猪的一般生物学特征基本上与普通家猪相同，一个主要的不同点是成年体重有差异。小型猪成熟时体重通常稳定在40～60kg，大致相当于人的体重。 MDL科研实验用巴马小猪 小型猪在科研研究中的应用 1、皮肤烧伤研究。 烧伤和烫伤是临床上常见的疾病，由于猪的皮肤与

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北京百奥思科生物科技有限公司致力于生物医药领域的技术研发与生物试剂的销售，设有20多家分支机构。力求为中国广大生物科技研究者提供最优质最快捷的贴心服务。截止目前公司已与500 多家高校、医院、药企等建立了良好的合作关系，，业务覆盖全国。未来公司也将一如既往地，以更好的产品、更高的质量、更优的服务回馈每一个客户。竭诚欢迎广大生物科技研究老师，前来咨询合作。

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