在 Western Blot 实验中，内参是指用于标准化蛋白质表达水平的参照蛋白。内参通常是一种在细胞中普遍表达且表达水平相对稳定的蛋白质，其表达水平不受实验条件或处理的影响。我们跑Western blot除了想知道目的蛋白在细胞/组织中是否表达，更重要的是想知道表达量的高低。Western blot条带的灰度值能够帮我们判断目的蛋白的表达丰度，但前提是你最初的上样量是一样的，这个上样量指的可不是上样体积，而是你的蛋白浓度。所以我们需要内参来帮我们

因为实验室自己买的医学耗材被某个混蛋顺手牵羊了，东西不贵，但是官网没货了！（气死！）现在实验急需，请问谁能交易一下！二手的都行！

在分子生物学领域，双荧光素酶实验因其高度敏感和操作简便的特性，成为了研究基因表达的重要工具。本文将深入探讨该技术的原理，并通过具体实例阐释其在各领域中的应用。 一、双荧光素酶实验原理 双荧光素酶实验的核心在于利用荧光素酶（Luciferase）催化荧光素产生发光现象，通过测量发光强度来监测目标基因的表达水平。该系统包含两种不同的荧光素酶：火萤酶（Luciferase）和海藻酸酯酶（Renilla）。这两种荧光素酶都需要ATP作为底物，但它

在生命科学和医学基础研究中，或多或少都需要用到抗体。抗体的应用场景不同、标记物众多，且针对同一标记物市场上往往有多个抗体可供选择，那么，我们如何从成百万上千万种抗体中，挑选出我们想要的那支呢? 因此，我们将推荐6个查找抗体的网站，帮大家解决找抗体难的问题! 01、Biocompare Biocompare(http://www.biocompare.com)不仅提供专门的生物试剂搜索工具，还有文章、产品评论、网络研讨会、视频和技术聚焦等资源，有兴趣的小伙伴可以从主页上

4月25日，佛山市人民政府代表团吴越彦、杨帅男莅临MDL，展开了一场旨在促进经济合作与招商的重要访问。此次访问的核心目标是探讨MDL将其业务版图扩展至佛山市的可能性。 访问期间，吴越彦首先代表佛山市人民政府对MDL在医学技术服务领域和子公司优乐动保在细胞药物研发领域的影响力表达了高度赞赏，并详细介绍了佛山市作为粤港澳大湾区核心城市之一的独特优势。他强调，佛山不仅拥有深厚的制造业基础和优良的营商环境，还积极响应国家

大家好，今天聊下做的aPCR数据可以进行分析，能不能用这个问题，判断 qPCR 数据是否可用需要考虑以下几个方面： 扩增曲线：扩增曲线应该呈现出典型的 S 型曲线，且曲线应该平滑，没有明显的锯齿状或平台期。 阈值线：阈值(threshold)一般是基线的标准偏差的10倍。阈值线应该位于扩增曲线的指数增长期，且应该在曲线的中部，不应过高或过低。 CT 值：CT 值(循环阈值)是指扩增曲线达到阈值线所需的循环数。CT 值应该在合理的范围内，一般来说，CT

1、蛋白样品不能反复冻融； 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）； 3、细胞水平要做Western Blot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot； 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性； 5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加5－10％； 6、如果上样量超载，

研究背景 核糖体生成是一个复杂的过程，包括rRNA转录、rRNA剪切、rRNA修饰、核糖体组装和前核糖体的输出，涉及三种RNA聚合酶、大约80种核糖体蛋白和大约200种非核糖体转录作用因子。核糖体生成在细胞核仁开始，在细胞质中结束。核仁的大小和密度会根据蛋白质合成的需求发生变化，而核仁纤维蛋白的表达和RNA聚合酶I的丰度通常用于反映核糖体生物合成的活性。 在癌细胞中，参与核糖体生成的基因经常会发生突变，增加的癌变风险。越来越多的证

01 什么是血清？ 血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后，分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。血清的主要作用是提供基本营养物质，包括激素、维生素、转运蛋白、微量元素、扩散因子和生长因子等细胞增殖和维持的必需成分，促进细胞生长。 02 血清的有什么作用？ 血清的成分十分复杂，既有协助物质运输的蛋白、营养物质，还有促进细胞生长的激素和因子等，正因为血清这种天然成分的复杂性，使

一、大、小鼠割（剪）尾采血 当取血量较少时采用本法。采血前将鼠尾部浸在50℃左右温水中数分钟或用大功率灯泡照射数分钟，麻醉动物，使尾部血管充盈。用75%酒精擦拭鼠尾，用锋利的刀片在尾部作一横切口，割破尾静脉或动脉，让血液自由滴入盛器或用毛细吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。若多次取血，最好从鼠尾末端开始。小鼠每次可取血0.1ml左右，大鼠每次可取血0.3～0.5ml。若只需要几微升血量，可用锐器（刀或剪刀）垂直割去

载体 在Cohen和Boyer的实验中，两种质粒都能在E. coli中复制。因此，这两种质粒都可以作为载体，使重组DNA得以复制。所有基因克隆实验都需要这样的载体，我们称之为载体（Vector），但典型的基因克隆实验只涉及一个载体，以及一个依赖于载体进行复制的外源DNA片段。外源DNA没有复制起点，即DNA复制开始的地方，因此除非将其放入具有复制起点的载体中，否则它无法复制。自20世纪70年代中期以来，已经开发了许多载体；这些载体分为两大类：质粒（pl

在Western Blot过程中，分子量Marker就像个标尺，可以帮助我们确定目标蛋白的分子量大小，判断蛋白是否成功分离，以及评估转移效率等。通过与蛋白 Marker 的迁移率进行比较，我们可以判断待测蛋白质的分子量范围，并评估电泳结果的准确性和可靠性。 此外，了解蛋白 Marker 的特点和使用方法对于实验的成功至关重要。选择合适的蛋白 Marker、正确使用和解读结果都需要一定的知识和经验。 蛋白Marker的分类 总体来说，目前最常用的蛋白Marker分为非预染

免疫荧光染色是实验室常用的技术之一，但在操作过程中，有许多需要注意的细节，任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项，并附上零失误封片技巧。 1. 抗体选择：选择针对您研究的目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体，一抗的浓度需要预实验摸索。一抗浓度过高(本身荧光实验，一抗的浓度就较高)，也是造成自发荧光强的重要原因。 2. 抗体稀释：根据抗体说明书建议，使用合适的稀释液和稀释比例进行

心肌缺血再灌注模型构建 随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导致心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导致严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导致比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再

菌种活化就是将保藏状态的菌种 放入适宜的培养基中培养 逐级扩大培养得到纯而壮的培养物 即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物 菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。 01、一般菌种临时存放及活化 1.低温保存管应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2.准备 37℃之 70﹪酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代

脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。 下面是编译自https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-tha的关于如何最好地（i）分离、（ii）冻存和（iii）复苏脾细胞的详细指南。 脾细胞的分离 材料 细胞过滤器，70µm尼龙，无菌 无菌剪刀和镊子或镊子 无菌培养皿 巴氏移液管，无

本期小助手帮大家详解一个细胞实验，从鼠的脂肪细胞中分离巨噬细胞的实验，步骤多、操作繁琐，但别急，跟着小助手一步一步来做，话不多说，上干货。 实验步骤 01 分离•用PBS清洗脂肪组织，并将组织放在冰上的培养皿中，用剪刀将组织切成小块（约3-5mm）。•将切碎的组织转移到含有7ml冰冷消化缓冲液的10ml圆底管中，此操作需一直保持在冰上。对于>1g的脂肪，将组织切碎并转移到含有10ml冰冷消化缓冲液的50ml锥形管中。•加入1ml（如脂肪组

比格犬(Beagle)又称米格鲁猎犬，原产英国，是国际通用的纯品种犬之一。目前，比格犬是国际公认的实验用犬，它具有体型小、性格温顺、反应均一、重复性好、大脑发达和适应性强等优点，被广泛应用于生物学和医学研究中，尤其是在药物非临床研究中是不可替代的实验动物。 一、科研实验和临床前研究对Beagle犬的年龄要求 年龄选择的标准：实验动物主要器官的重量、脏器系数及形态测量值是了解其健康状况的主要依据，也是慢性毒性实验指定的

一、原理： Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂含有WST-8，它在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 CCK-8法因其高灵敏度，无放射性的比色检测法的优点，可替代传统的MTT法。 二、检测步骤： 向96孔的各孔中加入100μl细胞悬液。 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。 在37

目的和原理 尽管胃不是药物的主要吸收场所，还是有某些由胃粘膜吸收的报道，用大鼠胃瘘技术直接测定胃的药物吸收。 操作步骤 雄性 wistar大鼠，体重220~300g，50mg/kg戊巴比妥i.p.麻醉，颈静脉插管，用以给予肝素化盐水(3000IU/kg)和实验过程中替换全血。实验前立即从肝素化供血大鼠采集替换血。在颈动脉作另一插管，用以收集循环血液样品。上腹部正中切口，注意结扎止血，用丝线结扎右侧胃网膜动静脉分支，然后用丝线结扎胃和左肝小叶后韧带，

按照现在的学制，硕士生一般两年半到三年毕业，博士生一般三到四年毕业。国外高校一般是一年完成硕士、后面三到四年完成博士，与我国硕博连读完成攻博时间相当。但是仍有一半以上博士生无法如期毕业。拖至五六年才能毕业的学生占相当比例，学生本人很着急，导师也很心焦。 现在博士生的毕业要求因不同高校、不同学科和不同导师而异，以前基本是研究成果要在特定档次的期刊上发表几篇论文，现在常采用“积分制”计量博士生的研究产

在学习过程中，我们经常会遇到各种PCR字眼，什么qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR，你了解PCR这个大家族吗？还在傻傻分不清吗？ 一、什么是PCR？ PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时

由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。 因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。 1 必须满足抗体选择的基本条件 流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。 2 注意荧光标记方式 流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在

在基因功能研究中常用两种基础策略，功能减弱或缺失，功能增强或获得。 实现基因功能减弱，可以采用RNA干扰（RNAi）技术下调目的基因表达。在RNAi使用中，siRNA或shRNA的设计是关键。长度约为21bp的siRNA与蛋白形成RISC复合物，结合目的基因的mRNA，从而使其降解，达到降低基因表达水平的目的（注意RNAi是作用于mRNA水平）。但需要引起注意的是，如果目的基因在细胞中本体表达就较低的情况下（一般ΔCT＞16），就不适合用RNAi了。 随着CRISPR/Cas9技术的成

为了缩小选择范围，实验中通常要考虑以下几个方面： 1. 分析或者应用类型 2. 样品的性质 3. 样品的物种 4. 一抗的宿主物种 5. 抗体的标记和检测 1应用 识别相同蛋白的不同抗体，由于识别位点不同，决定了不同的使用用途。例如，许多抗体识别位点位于折叠蛋白的内部，因此抗体只能识别降解或变性蛋白，这样的抗体往往只能应用于western blotting。有的抗体能够识别自然折叠状态上的表位。这样的抗体可应用于IHC、IF、FACS等应用。 当搜寻用于免疫组

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞系。细胞复苏是细胞培养的重要环节，下面小编具体给大家介绍下细胞复苏的protocal和注意事项！ 01、细胞复苏的原理 细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反即刻恢复。细胞复苏

目的和原理 尽管胃不是药物的主要吸收场所，还是有某些由胃粘膜吸收的报道，用大鼠胃瘘技术直接测定胃的药物吸收。 操作步骤 雄性 wistar大鼠，体重220~300g，50mg/kg戊巴比妥i.p.麻醉，颈静脉插管，用以给予肝素化盐水(3000IU/kg)和实验过程中替换全血。实验前立即从肝素化供血大鼠采集替换血。在颈动脉作另一插管，用以收集循环血液样品。上腹部正中切口，注意结扎止血，用丝线结扎右侧胃网膜动静脉分支，然后用丝线结扎胃和左肝小叶后韧带，

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或

分子克隆（基因克隆/DNA重组/载体构建）技术是一种在分子水平上操作的技术，用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来，然后通过体外重组、转化和转导等方法，将其插入到适合的克隆载体中，并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功能等研究。 具体操作流程：一、聚合酶链式反应（PCR）DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，

1 总述实时荧光定量PCR（后续简称为qPCR）顾名思义就是在PCR反应体系中加入荧光物质，通过荧光信号的实时接收监测PCR反应进程，由于其模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，以此为依据进而达到定量的目的。 简单来讲，qPCR可分为荧光染料法（以SYBR GreenⅠ最常用）与荧光探针法（TaqMan 探针）两种，而其结果分析方法也有绝对定量和相对定量之分。在此不一一赘述，此次分享以SYBR GreenⅠ法为例，结果分析选用相对定量法。 2 实验设计2.1 总

随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导致心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导致严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导致比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再灌注损伤。心肌缺血再灌注

随着冬季的来临，呼吸道疾病进入高发时期。我国监测数据显示，近期，呼吸道感染性疾病以流感为主。除此以外，还有呼吸道合胞病毒、肺炎支原体、鼻病毒、腺病毒等引起的呼吸道疾病。分析认为，近期我国急性呼吸道疾病持续的多发，与多种呼吸道病原体叠加感染有关，呈现多种病原体共同流行的态势。 不同群体流行的病原体不同 中国疾控中心监测结果显示，不同年龄段人群中，感染的病原体除了流感以外还有其他病原体。1-4岁儿童中，除了

模型制作方法 Wistar大鼠体重200-250g,雄性。将模型组动物麻醉后,切开臀部皮肤,钝性分离肌肉后,小心分离坐骨神经千,从坐骨神经三又分支处向中端每隔1mm用制的损毁夹夹75s,共夹4个点,共5min,夹力为50g,被夹的坐骨神经的长度约5-6mm。随后缝合皮肤。术部一次撒入青霉素粉剂防止感染 观测指标与分析 痛值测定:用RTY-1型热痛测试仪测定。结果显示:如果以手术侧(右侧)的痛闻的差值作为观察指标,从手术后第3天起差值与术前比较有统计学差异(P<0.01);术后第5、

细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并

心肌梗死是一种严重的心血管疾病，由于冠状动脉血供急剧减少或中断，使心肌持续性缺血缺氧以致坏死，损害心功能且可能导致心律失常、休克以及心力衰竭等严重后果，已成为威胁人类生命健康的重大疾病之一。 目前建立心肌梗死动物模型的方法有多种，包括：冠脉结扎法、药物法、球囊堵闭法、栓塞法以及血栓形成法等。今天小助手根据粉丝们的后台留言，今天输出冠脉结扎法的实操步骤。 一、首先认识心脏的结构 冠状动脉结扎法操作简单、

高血压病是世界公认的心血管疾病的主要危险因素。所有心脑血管病相关死亡，约半数由高血压所致。临床上常用的抗高血压药，在降压及改善症状方面尚存在许多不足。现代医学对高血压的确切病因及发病机制尚存在许多未知，加强对高血压病因及发病机制的研究，开发出更有效的治疗药物是非常必要的。而实验研究离不开高血压动物模型，好的动物模型能够较好地模拟疾病状态，为全方位的研究提供可能。 动物的选择 常见的动物模型类别有鼠、

一、免疫荧光技术 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技