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1行业痛点:1.价格贵2.周期慢3.成功率低 鱼和熊掌不可兼得,我认为的最优方案应该是:成功率保障的是前提条件下,客户需明确价格与周期的优先级。价格优先级高,就选直投正常稿,价格低。(这个是我这边的模式)周期优先级高,就选关系加急稿,周期快。
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0在 Western Blot 实验中,内参是指用于标准化蛋白质表达水平的参照蛋白。内参通常是一种在细胞中普遍表达且表达水平相对稳定的蛋白质,其表达水平不受实验条件或处理的影响。我们跑Western blot除了想知道目的蛋白在细胞/组织中是否表达,更重要的是想知道表达量的高低。Western blot条带的灰度值能够帮我们判断目的蛋白的表达丰度,但前提是你最初的上样量是一样的,这个上样量指的可不是上样体积,而是你的蛋白浓度。所以我们需要内参来帮我们
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00因为实验室自己买的医学耗材被某个混蛋顺手牵羊了,东西不贵,但是官网没货了!(气死!)现在实验急需,请问谁能交易一下!二手的都行!00000001、蛋白样品不能反复冻融; 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂,以增加蛋白的稳定性(建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂); 3、细胞水平要做Western Blot,一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot; 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白,所用的去垢剂就要温和得多,建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性; 5、若转膜不完全,可以加大上样量,还有转移时你可以用降低电流延长时间,转膜液中甲醇的比例多加5-10%; 6、如果上样量超载,00001 什么是血清? 血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后,分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。血清的主要作用是提供基本营养物质,包括激素、维生素、转运蛋白、微量元素、扩散因子和生长因子等细胞增殖和维持的必需成分,促进细胞生长。 02 血清的有什么作用? 血清的成分十分复杂,既有协助物质运输的蛋白、营养物质,还有促进细胞生长的激素和因子等,正因为血清这种天然成分的复杂性,使0一、大、小鼠割(剪)尾采血 当取血量较少时采用本法。采血前将鼠尾部浸在50℃左右温水中数分钟或用大功率灯泡照射数分钟,麻醉动物,使尾部血管充盈。用75%酒精擦拭鼠尾,用锋利的刀片在尾部作一横切口,割破尾静脉或动脉,让血液自由滴入盛器或用毛细吸管吸取,采血结束,伤口消毒并压迫止血。若多次取血,最好从鼠尾末端开始。小鼠每次可取血0.1ml左右,大鼠每次可取血0.3~0.5ml。若只需要几微升血量,可用锐器(刀或剪刀)垂直割去00在Western Blot过程中,分子量Marker就像个标尺,可以帮助我们确定目标蛋白的分子量大小,判断蛋白是否成功分离,以及评估转移效率等。通过与蛋白 Marker 的迁移率进行比较,我们可以判断待测蛋白质的分子量范围,并评估电泳结果的准确性和可靠性。 此外,了解蛋白 Marker 的特点和使用方法对于实验的成功至关重要。选择合适的蛋白 Marker、正确使用和解读结果都需要一定的知识和经验。 蛋白Marker的分类 总体来说,目前最常用的蛋白Marker分为非预染0免疫荧光染色是实验室常用的技术之一,但在操作过程中,有许多需要注意的细节,任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项,并附上零失误封片技巧。 1. 抗体选择:选择针对您研究的目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体,一抗的浓度需要预实验摸索。一抗浓度过高(本身荧光实验,一抗的浓度就较高),也是造成自发荧光强的重要原因。 2. 抗体稀释:根据抗体说明书建议,使用合适的稀释液和稀释比例进行000脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞,至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来,而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用,也可以冷冻保存,并在以后批量使用。 下面是编译自https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-tha的关于如何最好地(i)分离、(ii)冻存和(iii)复苏脾细胞的详细指南。 脾细胞的分离 材料 细胞过滤器,70µm尼龙,无菌 无菌剪刀和镊子或镊子 无菌培养皿 巴氏移液管,无0本期小助手帮大家详解一个细胞实验,从鼠的脂肪细胞中分离巨噬细胞的实验,步骤多、操作繁琐,但别急,跟着小助手一步一步来做,话不多说,上干货。 实验步骤 01 分离•用PBS清洗脂肪组织,并将组织放在冰上的培养皿中,用剪刀将组织切成小块(约3-5mm)。•将切碎的组织转移到含有7ml冰冷消化缓冲液的10ml圆底管中,此操作需一直保持在冰上。对于>1g的脂肪,将组织切碎并转移到含有10ml冰冷消化缓冲液的50ml锥形管中。•加入1ml(如脂肪组000目的和原理 尽管胃不是药物的主要吸收场所,还是有某些由胃粘膜吸收的报道,用大鼠胃瘘技术直接测定胃的药物吸收。 操作步骤 雄性 wistar大鼠,体重220~300g,50mg/kg戊巴比妥i.p.麻醉,颈静脉插管,用以给予肝素化盐水(3000IU/kg)和实验过程中替换全血。实验前立即从肝素化供血大鼠采集替换血。在颈动脉作另一插管,用以收集循环血液样品。上腹部正中切口,注意结扎止血,用丝线结扎右侧胃网膜动静脉分支,然后用丝线结扎胃和左肝小叶后韧带,0按照现在的学制,硕士生一般两年半到三年毕业,博士生一般三到四年毕业。国外高校一般是一年完成硕士、后面三到四年完成博士,与我国硕博连读完成攻博时间相当。但是仍有一半以上博士生无法如期毕业。拖至五六年才能毕业的学生占相当比例,学生本人很着急,导师也很心焦。 现在博士生的毕业要求因不同高校、不同学科和不同导师而异,以前基本是研究成果要在特定档次的期刊上发表几篇论文,现在常采用“积分制”计量博士生的研究产00由于在流式细胞实验过程中,荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。 因此,需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素,例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。 1 必须满足抗体选择的基本条件 流式抗体本身也是抗体,所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件:目标蛋白特异性,反应种属以及应用实验。 2 注意荧光标记方式 流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在0在基因功能研究中常用两种基础策略,功能减弱或缺失,功能增强或获得。 实现基因功能减弱,可以采用RNA干扰(RNAi)技术下调目的基因表达。在RNAi使用中,siRNA或shRNA的设计是关键。长度约为21bp的siRNA与蛋白形成RISC复合物,结合目的基因的mRNA,从而使其降解,达到降低基因表达水平的目的(注意RNAi是作用于mRNA水平)。但需要引起注意的是,如果目的基因在细胞中本体表达就较低的情况下(一般ΔCT>16),就不适合用RNAi了。 随着CRISPR/Cas9技术的成0为了缩小选择范围,实验中通常要考虑以下几个方面: 1. 分析或者应用类型 2. 样品的性质 3. 样品的物种 4. 一抗的宿主物种 5. 抗体的标记和检测 1应用 识别相同蛋白的不同抗体,由于识别位点不同,决定了不同的使用用途。例如,许多抗体识别位点位于折叠蛋白的内部,因此抗体只能识别降解或变性蛋白,这样的抗体往往只能应用于western blotting。有的抗体能够识别自然折叠状态上的表位。这样的抗体可应用于IHC、IF、FACS等应用。 当搜寻用于免疫组0000目的和原理 尽管胃不是药物的主要吸收场所,还是有某些由胃粘膜吸收的报道,用大鼠胃瘘技术直接测定胃的药物吸收。 操作步骤 雄性 wistar大鼠,体重220~300g,50mg/kg戊巴比妥i.p.麻醉,颈静脉插管,用以给予肝素化盐水(3000IU/kg)和实验过程中替换全血。实验前立即从肝素化供血大鼠采集替换血。在颈动脉作另一插管,用以收集循环血液样品。上腹部正中切口,注意结扎止血,用丝线结扎右侧胃网膜动静脉分支,然后用丝线结扎胃和左肝小叶后韧带,0Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相差不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢? 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20,也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或0分子克隆(基因克隆/DNA重组/载体构建)技术是一种在分子水平上操作的技术,用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来,然后通过体外重组、转化和转导等方法,将其插入到适合的克隆载体中,并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功能等研究。 具体操作流程:一、聚合酶链式反应(PCR)DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,000随着冬季的来临,呼吸道疾病进入高发时期。我国监测数据显示,近期,呼吸道感染性疾病以流感为主。除此以外,还有呼吸道合胞病毒、肺炎支原体、鼻病毒、腺病毒等引起的呼吸道疾病。分析认为,近期我国急性呼吸道疾病持续的多发,与多种呼吸道病原体叠加感染有关,呈现多种病原体共同流行的态势。 不同群体流行的病原体不同 中国疾控中心监测结果显示,不同年龄段人群中,感染的病原体除了流感以外还有其他病原体。1-4岁儿童中,除了0模型制作方法 Wistar大鼠体重200-250g,雄性。将模型组动物麻醉后,切开臀部皮肤,钝性分离肌肉后,小心分离坐骨神经千,从坐骨神经三又分支处向中端每隔1mm用制的损毁夹夹75s,共夹4个点,共5min,夹力为50g,被夹的坐骨神经的长度约5-6mm。随后缝合皮肤。术部一次撒入青霉素粉剂防止感染 观测指标与分析 痛值测定:用RTY-1型热痛测试仪测定。结果显示:如果以手术侧(右侧)的痛闻的差值作为观察指标,从手术后第3天起差值与术前比较有统计学差异(P<0.01);术后第5、0细胞迁移(Cell migration):因其类似体外伤口愈合过程,又名伤口愈合实验(Wound healing assay),是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理:在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕/伤口”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合,于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过测量不同时间点的划痕间距并00高血压病是世界公认的心血管疾病的主要危险因素。所有心脑血管病相关死亡,约半数由高血压所致。临床上常用的抗高血压药,在降压及改善症状方面尚存在许多不足。现代医学对高血压的确切病因及发病机制尚存在许多未知,加强对高血压病因及发病机制的研究,开发出更有效的治疗药物是非常必要的。而实验研究离不开高血压动物模型,好的动物模型能够较好地模拟疾病状态,为全方位的研究提供可能。 动物的选择 常见的动物模型类别有鼠、0一、免疫荧光技术 免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技0