先我想问楼主在转染前，你的细胞状态如何？如果细胞状态不好，用再好的试剂再好的方法都是没用的。我们实验室做转染时将siRNA 稀释液与RFECT稀释液混合，铺板在45%左右 。转染后4-6h就开始观察荧光了，然后48h小时后收细胞做mRNA水平检测 ，我觉得楼主要在确认细胞状态OK的前提下再去考虑转染的条件。