WB 实验封闭液大揭秘！你知道不同封闭液之间的差异吗？今天，我们将为你全面盘点各种封闭液，带你探索它们的独特之处。
Western blot封闭液配方有很多，为你推荐以下几种常用的配方：
5%脱脂奶粉：称取5g脱脂奶粉，溶于100ml 1xTBST。
使用5%脱脂奶粉封闭液的优点是价格便宜、易购买、使用方便，并且封闭效果好。缺点是脱脂奶粉是蛋白质混合物，其中含有酪蛋白，容易产生较高的背景信号，即使目标蛋白不是磷蛋白，也可能出现背景信号。
3%BSA：称取3g BSA粉末，溶于100ml 1xTBST。
牛血清白蛋白是从牛血清中提纯之后的一种球蛋白，是除了脱脂奶粉之外，非常常用的封闭剂。通常含有BSA的封闭液的浓度为2-5%（w/v）。但大家也可 以根据自己实验的需要来改变浓度，因为价格比较高，所以很多研究人员都是用尽可能低而有效的浓度。虽然BSA不是磷蛋白而且是单一蛋白， 与抗体有更好的特异性结合，减少非特异性结合的机会，通常比脱脂奶粉产生更低的背景信号。但是BSA 相对较昂贵，可能会增加实验成本，不实惠。
除了脱脂奶粉和BSA，还有一些其他常用的WB封闭液配方，比如：
5%鱼皮明胶封闭液：称取5g明胶，溶于100ml 1xTBST。
用鱼胶当封闭液是从猪皮胶演变而来的。鱼胶是从冷水鱼的皮肤中提取出来的，即使在温度较低的情况下也会不会凝固。通常使用的浓度为0.1-5% （w/v）。不像脱脂奶粉和BSA，它不含有任何的血清蛋白，所以就不会和哺乳动物抗体产生交叉反应，大大降低了背景信号。但是鱼胶不能用来封闭生物素- 抗生物素抗体蛋白系统，因为它含有内源性生物素。
5%酪蛋白封闭液：称取5g酪蛋白，溶于100ml 1xTBST。
酪蛋白封闭液，由于不含其它杂质，所以可以减少和膜上的待检测蛋白的非特异性结合，从而降低背景信号。效果类似于BSA封闭液。缺点是不适用于检测磷酸化的蛋白。
封闭液的选取可参考以下建议：
避免使用牛奶或牛血清白蛋白：若使用来自山羊、马或绵羊的一抗，则需避免使用牛奶或牛血清白蛋白，因为牛的IgG可能会与抗体相互作用，产生干扰。
使用BSA时需注意：BSA和dry milk有时含有牛的IgG，许多其他的如抗牛、抗山羊和抗绵羊的二抗都会与牛的IgG发生反应。因此，使用BSA或dry milk进行阻断或稀释会显著增加背景并降低抗体效价。建议使用与二抗种属来源一致的标准血清进行阻断。